Tha sìoltachan flùraiseach na phàirt riatanach de mhiocroscop fluorescence. Tha trì sìoltachain bunaiteach aig siostam àbhaisteach: sìoltachan excitation, sìoltachan sgaoilidh agus sgàthan dichroic. Mar as trice bidh iad air am pacadh ann an ciùb gus am bi am buidheann air a chuir a-steach don mhiocroscop.
Ciamar a tha sìoltachan fluorescence ag obair?
Criathrag excitation
Bidh sìoltachain excitation a ’sgaoileadh solas tonn-tonn sònraichte agus a’ bacadh tonnan eile. Faodar an cleachdadh airson dathan eadar-dhealaichte a dhèanamh le bhith a’ gleusadh a’ chriathrag gus nach bi ach aon dath ann. Bidh na sìoltachain excitation a’ tighinn ann an dà phrìomh sheòrsa - sìoltachain pas fada agus sìoltachain pas bann. Mar as trice is e sìoltachan bann-leathann a th’ anns an exciter a bhios a’ dol seachad air dìreach na tonnan a tha an fluorophore a’ gabhail a-steach, agus mar sin a’ lughdachadh spionnadh bho thùsan flùraiseach eile agus a’ bacadh solas excitation anns a’ chòmhlan sgaoilidhean flùraiseach. Mar a tha air a shealltainn leis an loidhne ghorm san fhigear, is e BP 460-495, a tha a 'ciallachadh nach urrainn dha a dhol tron fhlùraichean ach 460-495nm.
Tha e air a chuir taobh a-staigh slighe soillseachaidh miocroscop flùraiseach agus a’ sìoladh a-mach gach tonn-tonn den stòr solais ach a-mhàin an raon excitation fluorophore. Bidh an tar-chuir sìoltachain as ìsle ag òrdachadh soilleireachd agus soilleireachd ìomhaighean. Thathas a ’moladh tar-chuir 40% aig a’ char as lugha airson sìoltachan excitation sam bith gus am bi an tar-chuir nas fheàrr> 85%. Bu chòir leud-bann a’ chriathrag excitation a bhith gu tur taobh a-staigh raon excitation fluorophore gus am bi tonn-tonn an ionaid (CWL) den chriathrag cho faisg ‘s as urrainn air tonn-tonn excitation an fluorophore. Bidh dùmhlachd optigeach sìoltachain excitation (OD) ag òrdachadh dorchadas ìomhaigh cùil; Tha OD na thomhas air dè cho math ‘s a bhios sìoltachan a’ blocadh na tonnan taobh a-muigh raon tar-chuir no leud-bann. Thathas a’ moladh co-dhiù OD de 3.0 ach tha OD de 6.0 no nas motha air leth freagarrach.
Criathrag sgaoilidh
Bidh sìoltachain sgaoilidh a’ frithealadh an adhbhar a bhith a’ leigeil leis an fhlùr-fhuaim ion-mhiannaichte bhon sampall an lorgaire a ruighinn. Bidh iad a’ cuir casg air tonnan nas giorra agus tha tar-chuir àrd aca airson tonnan nas fhaide. Tha an seòrsa sìoltachain cuideachd co-cheangailte ri àireamh, me BA510IF anns an fhigear (criathrag cnap-starra eadar-theachd), tha an sònrachadh sin a’ toirt iomradh air an tonn-tonn aig 50% den tar-chuir as àirde aige.
Tha na h-aon mholaidhean airson sìoltachain excitation fìor airson sìoltachain sgaoilidhean: tar-chuir as ìsle, leud-bann, OD, agus CWL. Bidh sìoltachan sgaoilidh leis an CWL air leth freagarrach, an tar-chuir as lugha, agus cothlamadh OD a’ toirt seachad na h-ìomhaighean as soilleire a tha comasach, leis a’ bhacadh as doimhne, agus a’ dèanamh cinnteach gun lorgar na comharran sgaoilidh as laige.
Sgàthan Dichroic
Tha an sgàthan dichroic air a chuir eadar an sìoltachan excitation agus sìoltachan sgaoilidh aig ceàrn 45 ° agus a’ nochdadh a ’chomharra excitation a dh’ ionnsaigh an fluorophore fhad ‘s a tha e a’ tar-chuir a ’chomharra sgaoilidh a dh’ ionnsaigh an lorgaire. Tha eadar-ghluasadan geur aig sìoltachain dichroic air leth freagarrach agus luchd-sgoltadh beam eadar an meòrachadh as motha agus an tar-chuir as àirde, le meòrachadh> 95% airson leud-bann a’ chriathrag excitation agus tar-chuir de> 90% airson leud-bann a ’chriathrag sgaoilidh. Tagh an criathrag leis an tonn-tonn eadar-ghearradh (λ) den fluorophore san amharc, gus solas air seachran a lughdachadh agus gus an co-mheas comharra-gu-fuaim ìomhaigh flùraiseach a mheudachadh.
Is e an sgàthan dichroic san fhigear seo an DM505, air ainmeachadh mar sin leis gur e 505 nanometers an tonn-tonn aig 50% den tar-chuir as àirde airson an sgàthan seo. Tha an lùb tar-chuir airson an sgàthan seo a’ sealltainn tar-chuir àrd os cionn 505 nm, tuiteam cas ann an tar-chuir air an taobh chlì de 505 nanometers, agus faileasachd as àirde air an taobh chlì de 505 nanometers ach dh’ fhaodadh gu bheil beagan tar-chuir nas ìsle na 505 nm.
Dè an diofar eadar sìoltachain pas fada agus pas bann?
Faodar sìoltachain fluorescence a roinn ann an dà sheòrsa: pas fada (LP) agus pas bann (BP).
Bidh sìoltachain pas fada a ’sgaoileadh tonnan fada agus a’ cuir casg air an fheadhainn as giorra. Is e an tonn-tonn gearraidh an luach aig 50% den tar-chuir as àirde, agus tha gach tonn-tonn os cionn an gearraidh air a ghluasad leis na sìoltachain pas fada. Bidh iad gu tric air an cleachdadh ann an sgàthan dichroic agus sìoltachain sgaoilidhean. Bu chòir sìoltachain longpass a chleachdadh nuair a dh’ fheumas an tagradh an cruinneachadh as motha de sgaoilidhean agus nuair nach eil leth-bhreith speactram ion-mhiannaichte no riatanach, a tha mar as trice fìor airson probes a ghineas aon ghnè sgaoilidhean ann an sampallan le ìrean caran ìosal de autofluorescence cùl-fhiosrachaidh.
Chan eil sìoltachain pas-còmhlain ach a’ tar-chuir còmhlan tonn-tonn sònraichte, agus a’ cuir casg air feadhainn eile. Bidh iad a’ lughdachadh crosstalk le bhith a’ leigeil le dìreach a’ chuibhreann as làidire den speactram sgaoilidhean fluorophore a bhith air a thar-chuir, a’ lughdachadh fuaim autofluorescence agus mar sin a’ leasachadh a’ cho-mheas comharra-gu-fuaim ann an sampallan autofluorescence àrd cùl-raon, nach urrainn sìoltachain pas fada a thabhann.
Cia mheud seòrsa de sheata sìoltachain fluorescence as urrainn BestScope a thoirt seachad?
Tha cuid de sheòrsan sìoltachain cumanta a’ toirt a-steach sìoltachain gorm, uaine agus ultraviolet. Mar a chithear sa chlàr.
| Seata Filter | Criathrag excitation | Sgàthan Dichroic | Criathrag bacaidh | Lampa LED Fad tonn | Iarrtas |
| B | BP 460-495 | DM505 | BA510 | 485 nm | · FITC: Modh antibody flùraiseach · Acidine orange: DNA, RNA · Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535 nm | · Rhodamine, TRITC: Modh antibody flùraiseach · Propidium iodide: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nmh | · Sealladh fèin-fhlùraichean · DAPI: staining DNA · Hoechest 332528, 33342: air a chleachdadh airson staining Chromosome |
| V | BP400-410 | DM 455 | BA460 | 405 nm | · Catecholamines · 5-hydroxy tryptamine · Tetracycline: cnàimhneach, fiaclan |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | ·Cò5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Tha seataichean sìoltachain a thathas a’ cleachdadh ann an togail fluorescence air an dealbhadh timcheall air na prìomh thonnan a thathas a’ cleachdadh ann an tagraidhean fluorescence, a tha stèidhichte air na fluorophores as motha a thathas a’ cleachdadh. Air an adhbhar seo, tha iad cuideachd air an ainmeachadh às deidh an fluorophore a tha iad an dùil airson ìomhaighean, leithid ciùban sìoltachain DAPI (gorm), FITC (uaine) no TRITC (dearg).
| Seata Filter | Criathrag excitation | Sgàthan Dichroic | Criathrag bacaidh | Lampa LED Fad tonn |
| FITC | BP 460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nmh |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 nm |
| FL-Auramine | BP 470 | DM 480 | BA485 | 450 nm |
| Texas Dearg | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nmh |
| Cherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nmh |
Ciamar a roghnaicheas tu sìoltachan flùraiseach?
1. Is e am prionnsapal airson sìoltachan flùraiseach a thaghadh leigeil leis an t-solas fluorescence / sgaoilidh a dhol tron deireadh ìomhaigh cho fada ‘s a ghabhas, agus casg a chuir air an t-solas excitation aig an aon àm, gus an co-mheas comharra-gu-fuaim as àirde fhaighinn. Gu sònraichte airson a bhith a ’cur an sàs excitation multiphoton agus microsgop meòrachaidh iomlan a-staigh, bidh am fuaim lag cuideachd ag adhbhrachadh bacadh mòr air buaidh ìomhaigh, agus mar sin tha an riatanas airson co-mheas comharra gu fuaim nas àirde.
2. Faigh eòlas air speactram excitation agus sgaoilidhean an fluorophore. Gus seata sìoltachain fluorescence a thogail a ghineas ìomhaigh àrd-choimeas àrd le cùl-raon dubh, bu chòir sìoltachain excitation agus sgaoilidhean tar-chuir àrd a choileanadh le glè bheag de ripple passband thairis air na roinnean a tha a rèir stùcan no sgaoilidhean excitation fluorophore.
3. Beachdaich air seasmhachd sìoltachain flùraiseach. Feumaidh na sìoltachain sin a bhith neo-fhaicsinneach do stòran solais dian a ghineadh solas ultraviolet (UV) a dh ’fhaodadh leantainn gu“ losgadh a-mach ”, gu sònraichte an sìoltachan exciter leis gu bheil e fo smachd làn dhian an stòr soillseachaidh.
Na diofar dhealbhan sampall fluorescent
Tha na goireasan air an cruinneachadh agus air an eagrachadh air an eadar-lìn, agus chan eilear gan cleachdadh ach airson ionnsachadh agus conaltradh. Ma tha briseadh sam bith ann, cuir fios thugainn gus cuir às.
Ùine puist: Dùbhlachd-09-2022